Brdu检测细胞周期结果如何用Flow J分析

Brdu检测细胞周期结果如何用Flow J分析

细胞增值的检验方法：Brdu标记法1、细胞以1.5*105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中，培养一天，用含0.4%FCS培养液同步化三天，使绝大多数细胞处于Go期。2、终止细胞培养前，加入Brdu，37℃孵育40min。3、弃培养液，波片用PBS洗涤3次。4、甲醇/醋酸固定10min。5、经固定的波片空气干燥，0.3%H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。6、5%正常兔血清封闭。7、甲酰胺100℃，5min变性核酸。8、冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠细胞增值的检验方法：Brdu标记法1、细胞以1.5*105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中，培养一天，用含0.4%FCS培养液同步化三天，使绝大多数细胞处于Go期。2、终止细胞培养前，加入Brdu，37℃孵育40min。3、弃培养液，波片用PBS洗涤3次。4、甲醇/醋酸固定10min。5、经固定的波片空气干燥，0.3%H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。6、5%正常兔血清封闭。7、甲酰胺100℃，5min变性核酸。8、冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠Brdu单抗，阴性对照加PBS或血清。9、按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及Brdu阳性细，数，计算标记指数。rdu单抗，阴性对照加PBS或血清。9、按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及Brdu阳性细，数，计算标记指数。